一、产品详细描述

•英文品名：IVISbriteD-LuciferinPotassiumSaltBioluminescentSubstrate(100mg)(XenoLight)

•中文参考译名：IVISbriteD-荧光素钾盐生物发光底物（100mg）（XenoLight系列）

•核心品牌：Revvity（瑞孚迪），由PerkinElmer（珀金埃尔默）生命科学业务升级而来，继承了其在高灵敏度检测领域的基因。

•主要货号：122799A-100MG。此外，该产品体系还包含其他规格变体，例如单瓶装1克（货号122799A）、5瓶装1克（货号122799A-5）以及10瓶装1克（货号122799A-10），以满足不同通量与周期的实验室需求。

•物理形态：白色至类白色冻干粉末（Lyophilized），这种干燥状态极大地方便了长期储存与精准称量，并能有效抑制因水合作用导致的底物降解。

•核心化学式与分子量：C11H7KN2O3S2，分子量约为318.4。钾盐的形式赋予了该底物的水溶性与溶解速率。

•应用范畴：专为实现高质量、高信噪比的体内（Invivo）及体外（Invitro）生物发光成像而设计。

二、工作原理深度解析

知其然，更需知其所以然。为了帮助您更好地把控实验节奏，我们有必要深入剖析这套经典发光系统的生化机制。

本产品中的“D-荧光素"（D-Luciferin）是萤火虫生物发光系统（FireflyLuciferaseSystem）的核心底物。当您的实验模型（如肿瘤细胞、转基因小鼠或慢病毒感染的细胞系）表达了萤火虫荧光素酶（FireflyLuciferase,FLuc）后，在氧气和三磷酸腺苷（ATP）存在的生理环境下，加入的荧光素会被荧光素酶催化氧化。

这个氧化反应并非简单的物质转换，而是一个激发态到基态的跃迁过程。在氧化过程中，荧光素会释放出二氧化碳（CO2）并产生激发态的氧荧光素（Oxyluciferin）。当氧荧光素从激发态返回基态时，便会以光子的形式释放多余的能量。由于这一过程严格依赖于ATP和萤光素酶的浓度，因此所发出的光子数量能够与细胞内的代谢活性或目标酶的表达水平建立起极为精确的定量关系。

更为巧妙的是，D-荧光素具有出色的细胞膜通透性。这意味着，无论是体外培养的细胞还是活体动物体内的深层组织，只需将溶解好的底物加入体系或注射入体内，它便能自发穿过细胞膜，进入细胞内部与荧光素酶相遇，从而点亮特定的细胞群。这种非侵入性或微创的示踪方式，正是当今肿瘤学、免疫学及药物研发领域梦寐以求的技术手段。

三、产品核心特点

在竞争激烈的科研试剂市场中，本产品之所以能成为众多高水平实验室的优选，得益于其在制造工艺与质控体系上的多重优势：

1.化学纯度与批间一致性：本产品的合成路线经过精心优化，杂质含量被压制到极低水平。每一批次出厂前均经过严苛的核磁共振（NMR）和高效液相色谱（HPLC）双重检测，确保不同时间、不同批次购买的产品在性能上保持高度一致。这对于需要长期开展纵向动物实验的研究者而言，无异于吃下了一颗定心丸。

2.优异的溶解性能与水溶性：作为钾盐形式，它相较于游离酸形式更容易溶于水或缓冲盐溶液，不易产生沉淀，能够有效避免因底物结晶导致的管路堵塞或注射部位刺激。

3.极低的生物毒性：在配方设计中，我们充分考量了活体动物的耐受度。在推荐的工作浓度范围内，该底物对细胞活力和动物生理状态几乎不产生干扰，确保了实验结果的生理学真实性。

4.广泛的系统兼容性：虽然产品冠以“IVISbrite"之名，但它绝不仅局限于搭配某一特定品牌的成像设备。它与市面上绝大多数配备高灵敏度制冷CCD相机的活体成像系统（如IVIS系列、Spectrum系列、Quantum系列等）均能适配，充分发挥设备的最大灵敏度。.

四、解决实验中的核心痛点

在日常的科研活动中，研究者们在使用普通生物发光底物时常?；嵊龅街疃嗔钊送诽鄣奈侍?，而本产品正是为了直击这些痛点而生：

•痛点一：信号衰减快，难以捕捉动态过程。许多劣质底物在体内代谢过快，导致发光窗口期极短，极易错过最佳拍摄时机。本产品经过特殊的稳定化处理，能够在动物体内维持较长时间的有效浓度，为您从容调整动物体位、聚焦拍照预留了充足的时间。

•痛点二：背景噪音高，弱信号被淹没。底物中的杂质不仅会与金属离子发生反应产生非特异性发光，还会增加组织的自体荧光。本产品的高纯度特质极大程度地压低了背景噪音，让深埋在组织深处的微小转移灶也能脱颖而出。

•痛点三：溶解度差，易析出结晶。普通底物在配制高浓度母液时极易析出，不仅造成浪费，析出的晶体还可能在注射时引起动物强烈的刺痛感，导致动物躁动甚至死亡。钾盐形态的本品遇水即溶，极大地提升了动物福利与实验安全性。

五、储存与运输规范

为了保持底物的最佳活性，正确的储存与运输至关重要。请务必遵守以下规范：

•运输条件：产品出厂时会放入足量的蓝冰（BlueIce）中进行冷链运输，确保其在路途中始终处于低温环境。

•未开封储存：收到产品后，若不立即使用，请将其存放在-20°C的冰箱中避光保存。在此条件下，冻干粉末可保持稳定长达数月甚至更久。

•复溶后储存：建议在无菌环境下（如超净工作台内）进行称量与溶解。复溶后的溶液若未用完，严禁在4°C或室温下长期存放，必须分装成单次使用的小份（如每管100μL或200μL），置于-20°C或-80°C冷冻保存，以避免反复冻融导致的活性丧失。

•避光防潮：荧光素对光线和空气中的水分较为敏感。日常操作时应尽量在光线较暗的环境下进行，且每次取出所需用量后，应立即将主容器盖紧并放回干燥器或-20°C冰箱中。

六、详细使用方法与实操建议

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为了帮助您获得最佳的成像效果，以下我们将分场景为您提供细致入微的操作指导。请注意，具体的实验条件仍需根据您的实际模型进行微调。

1.体外（InVitro）细胞与组织成像操作

体外实验通常用于验证细胞系的发光效率或进行药物筛选的早期评估。

•母液配制：建议您在无菌PBS（磷酸盐缓冲液）或无菌注射用水中，将本品配制为15mg/mL至30mg/mL的高浓度储备液。由于本品为钾盐，溶解过程通?；岱浅Ｑ杆偾仪宄?。若需长时间保存母液，请分装后存于-20°C。

•工作液稀释：根据您的培养基体积，将母液稀释至终浓度为150μg/mL至300μg/mL的工作液。例如，在96孔板中，每孔加入100μL含底物的新鲜培养基，最终底物量约为15μg至30μg。

•孵育与检测：加入底物工作液后，将细胞在标准培养箱（37°C,5%CO2）中孵育5至10分钟，让底物充分进入细胞并与荧光素酶反应。随后，将培养板放入发光检测仪（Luminometer）或带有发光模式的成像系统进行信号采集。

2.体内（InVivo）动物成像操作

活体动物成像是该产品的主战场，常用于肿瘤生长监测、免疫细胞追踪、基因表达调控等。

•底物准备：将冻干粉溶解于无菌PBS或无菌生理盐水中，配制成15mg/mL至30mg/mL的无菌母液。此母液可在4°C短期保存数天，但建议现配现用以获得最佳效果。

•动物注射：根据实验需求选择合适的注射途径。常用的方式是腹腔注射（Intraperitoneal,IP），这种方法操作简便，底物能够通过腹膜快速吸收进入血液循环。对于某些需要极快起效或特定器官靶向的实验，也可选择尾静脉注射（Intravenous,IV）或皮下注射（Subcutaneous,SC）。

•用量参考：常规的荷瘤小鼠（20g-25g）每次成像的底物用量约为100mg/kg至150mg/kg。例如，一只20g的小鼠，若按150mg/kg计算，需注射约3mg的底物，相当于100μL的30mg/mL母液。

•麻醉与成像时机：注射完成后，需将小鼠放入麻醉诱导盒中进行气体麻醉（如异氟烷）。通常在注射后10到15分钟，信号达到峰值。此时应尽快将动物转移至成像舱室，调整好体位并进行连续动态拍摄。由于本底物发光持续时间较长，您可以每隔5分钟抓取一帧图像，后期从中挑选出信噪比最高的一张。

3.浓度摸索与对照设置

不同细胞系或组织表达的萤光素酶水平差异巨大。强烈建议您在正式开展大规模动物实验前，先通过体外细胞滴定实验确定一个合适的底物浓度范围，避免底物过量导致的“底物抑制效应"（即过高浓度的萤光素反而会抑制发光反应）。

七、常见问题与解决方案深度剖析

在漫长的科研道路上，遇到问题是在所难免的。我们整理了使用者最常遇到的几大难题，并为您提供一套结构化的排查逻辑：

问题一：动物体内全检测不到发光信号

•可能原因1：底物未溶解或发生了结晶。钾盐虽然易溶，但若水温过低或pH值端，仍可能出现溶解不全的情况。

?解决方案：确保使用温水（约37°C）或温和涡旋助溶，配制好的母液应是全透明的。注射前可用0.22μm滤膜过滤除菌，既去除了可能的微粒，又能确认溶解状态。

•可能原因2：细胞或组织中的萤光素酶表达量极低。

?解决方案：在体外先将细胞与底物孵育，用酶标仪确证其是否能发出强光。若体外也无信号，则需回顾病毒转导效率或转基因动物的构建是否成功。

•可能原因3：动物接种位置过深或肿瘤体积过小。

?解决方案：光子的穿透能力有限，特别是对于红光波段以外的波长，组织在_depth超过1-2厘米时光信号会急剧衰减?？梢猿⑹愿晃槊舻某上裣低常蚋挠糜馑孛副泶锔康奈茸赴?。

问题二：发光信号极弱或不稳定

•可能原因1：底物降解失效。反复冻融或储存不当会导致D-荧光素被氧化。

?解决方案：检查底物颜色，若母液变黄则说明已经变质，需弃用并重新配制。务必做好母液的分装工作。

•可能原因2：动物体温过低。生物发光反应受温度影响显著，低温会大幅降低酶活性。

?解决方案：确保动物在麻醉期间体温维持正常，可使用带有恒温板的成像平台，或在麻醉盒内放置加热垫。

•可能原因3：注射剂量不足或吸收不良。

?解决方案：适当提高注射剂量（不超过200mg/kg），或改为尾静脉注射以bypass腹膜吸收环节。

问题三：背景噪音过高，特异性信号被掩盖

•可能原因1：底物纯度不够，含有能产生自发荧光的杂质。

?解决方案：这正是推荐使用本品的原因。若您当前使用的正是本品，可检查是否发生了交叉污染，或尝试更换一批号试剂。

•可能原因2：动物毛发干扰。深色毛发会产生强烈的自体荧光。

?解决方案：在成像前对特定区域进行剃毛处理，减少毛发带来的背景干扰。

•可能原因3：成像系统参数设置不当。

?解决方案：降低曝光时间或调整BINNING值，在信号饱和前找到最佳的曝光区间。

问题四：同一组内不同动物之间的信号重复性极差

•可能原因1：底物分布不均。腹腔注射时，若针头刺入位置过浅或底物渗漏，会导致实际进入体内的药量存在个体差异。

?解决方案：由经验丰富的人员进行操作，注射后轻轻按摩注射部位以促进吸收?；蛘咄骋桓奈簿猜鲎⑸洹?/span>

•可能原因2：动物代谢速率差异。不同小鼠的肝肾功能状态不一，导致底物的清除半衰期不同。

?解决方案：增加每只动物的成像时间点（如注射后10min、15min、20min均拍摄），取峰值信号进行横向对比，而非固定单一时间点。

八、适用范围与兼容性声明

本产品是一款通用性强的基础级生物发光底物，广泛适用于各类基于萤火虫荧光素酶（FireflyLuciferase）的报告基因检测系统。它不仅能够配合Revvity（原PerkinElmer）旗下的IVISbrite稳转肿瘤细胞系和IVISbrite慢病毒颗粒产品，还可用于追踪任何携带FLuc报告基因的细胞、细菌或病毒载体。

在设备端，它与装备了高灵敏度制冷CCD相机的二维/三维活体光学成像系统全兼容。无论您需要观察表皮层的伤口愈合，还是深层脑组织、骨髓腔内的免疫微环境，只要您的设备具备生物发光（Bioluminescence）检测通道，本品都能助您一臂之力。

九、注意事项与安全操作规范

尽管本产品已被证实对实验动物的急性毒性极低，但在日常操作中仍需秉持“安全第一"的原则：

1.个人防护：称量粉末或操作母液时，请务必穿戴实验服、佩戴一次性丁腈手套和护目镜，避免试剂直接接触皮肤或吸入粉尘。

2.生物危害防范：任何接触过活体动物或病原体的废弃物（如用过的移液枪头、注射器等）均属于潜在生物危害物。必须将其浸泡于10%漂白剂溶液中消毒至少30分钟后，方可作为生物危险废物丢弃。

3.动物伦理：在进行动物实验时，请严格遵守所在机构的动物?；び胧褂梦被幔↖ACUC）制定的各项伦理规范。合理控制麻醉剂浓度，减轻动物痛苦。

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